Lipopeptides, such as surfactins are important biosurfactants produced by Bacillus sp. that find applications in many areas (environment, medicine, and food industries). Giving their importance, the use of simple detection methods will facilitate screening and quantification. In the present work, the authors describe a completely automated workflow for the screening of lipopeptide-producing strains, including quantification. First, isolated colonies from environmental samples are automatically picked and inoculated in 96 wells growth plate. After overnight incubation, surfactin produced in the broth is quantified, using a new sensitive fluorescent method. The method uses fluorescein (FL), which is an anionic dye at neutral to alkaline pH and forms a stable complex with the cationic surfactant cetylpiridinium chloride (CPC), quenching fluorescence. Upon addition of surfactin or other lipopeptides, fluorescein is released from the CPC-FL complex and quantified. The robustness of this method is assessed by comparing the quantification results to those conventionally measured by RP-UPLC and the results of strain screening are confirmed by MALDI-ToF analysis. The authors report for the first time the successful application of this analytical method for high-throughput screening of novel lipopeptide-producing strains.

Les lipopeptides, tels que les surfactines, sont des biosurfactants importants produits par Bacillus sp. qui trouvent des applications dans de nombreux domaines (environnement, médecine et industries alimentaires). Compte tenu de leur importance, l'utilisation de méthodes de détection simples facilitera leur criblage et leur quantification. Dans le présent travail, les auteurs décrivent un workflow de travail entièrement automatisé pour l'identification des souches productrices de lipopeptides, ainsi que la quantification de ces derniers. Tout d'abord, les colonies isolées des échantillons environnementaux sont automatiquement prélevées et inoculées dans une plaque 96 puits. Après une incubation d'une nuit, la surfactine produite dans le milieu de culture est quantifiée à l'aide d'une nouvelle méthode de lecture basée sur la fluorescence. La méthode utilise la fluorescéine (FL), qui est un colorant anionique au pH neutre à alcalin et qui forme un complexe stable avec le tensioactif cationique chlorure de cétylpiridinium (CPC), éteignant la fluorescence. Lors de l'ajout de surfactine ou d'autres lipopeptides, la fluorescéine est libérée du complexe CPC-FL et quantifiée. La robustesse de cette méthode est évaluée en comparant les résultats de quantification à ceux mesurés conventionnellement par RP-UPLC et les résultats du criblage de souches sont confirmés par analyse MALDI-ToF. Les auteurs rapportent ainsi ici pour la première fois l'application réussie de cette méthode analytique pour le criblage à haut débit de nouvelles souches productrices de lipopeptides.