Setenta cepas de Staphylococcus coagulase positiva isoladas de leite de vacas com mastite subclínica e de queijo tipo Minas Frescal foram submetidas a testes bioquímicos para identificação das espécies e analisadas quanto a produção de algumas enzimas tais como: catalase, coagulase, linase, desoxirribonuclease (Dnase), hemolisinas, penicilinase, protease e termonuclease (TNase). Foram identificadas as espécies S. aureus, S. aureus subsp., anaerobius, S. delphini, S. hyicus, S. intermedius, S. schleiferi subsp. coagulans. As cepas que não tiveram sua identificação confirmada permaneceram com Staphylococcus coagulase positiva (SCP). A espécie predominante foi S. aureus (51,4 por cento) seguido dos SCP (22,8 por cento). Todas as cepas produziram pelo menos uma ou mais enzimas analisadas, sendo S. aureus a única espécie que apresentou resultados positivos na análise de todas as enzimas e obteve o maior percentual para a produção de TNase (50 por cento). Com relação à biotipagem, 93,3 por cento das cepas de S. aureus foram consideradas de origem bovina juntamente com 100 por cento das cepas SCP. A contaminação de alimentos por cepas patogênicas de Staphylococcus spp. pode resultar em problemas para a Saúde Pública, bem como em prejuízos para a indústria de alimentos.