Purification de particules virales associees a l'enroulement de la vigne et mise au point d'un protocole ELISA permettant leur detection - INRAE - Institut national de recherche pour l’agriculture, l’alimentation et l’environnement Accéder directement au contenu
Article Dans Une Revue Agronomie Année : 1988

Purification of virus particles associated with grapevine leafroll disease and development of an ELISA procedure to allow their detection

Purification de particules virales associees a l'enroulement de la vigne et mise au point d'un protocole ELISA permettant leur detection

Résumé

Closterovirus-like particles were purified from leafroll-diseased grapevines. These particles were extracted from leaves by a fractionated PEG precipitation and purified by centrifugation through a sucrose gradient. The purified nucleoproteins were injected into a rabbit to produce immunoglobulins (IgGR) useful for the development of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The same closterovirus particles were used to immunize a hen in order to extract immunoglobulins from egg yolk IgGC. The simultaneous use of yolk IgGC and IgGR absorbed with healthy leaf extracts allowed the detection of leafroll-diseased grapevines by ELISA. Comparison of extracts from different grapevine organs showed that leaves were the best source of material for routine diagnosis. In order to check the correlation between leafroll symptoms and the presence of closterovirus-like particles, we analysed 61 grapevines from different sources. Immunochemical reagents specific to closterovirus particles isolated from leafroll-affected grapevines obtained by GONSALVES (NY-1) and Dr GUGERLI (GLRV1) were also used in these serological analyses. Among the 50 diseased grapevines, 44 showed reactions in at least one of the ELISA procedures. None of the healthy grapevines reacted in the ELISA mentioned previously. Two different viruses could be distinguished on the basis of these serological reactions. Using immunosorbent electron microscopy (ISEM), we checked the reactions observed in ELISA.
Des particules virales de type clostérovirus ont été purifiées de vignes atteintes d’enroulement. Ces particules sont extraites par une précipitation fractionnée au polyéthylèneglycol (PEG 6000) permettant de réduire la proportion de contaminants végétaux. Elles sont finalement purifiées par centrifugation dans un gradient de saccharose. Les nucléoprotéines virales sont injectées à un lapin afin de produire les immunoglobulines nécessaires à leur détection en ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Parallèlement, les mêmes particules virales ont servi à l’immunisation d’une poule et à l’extraction d’immunoglobulines à partir des oeufs recueillis. L’utilisation simultanée d’immunoglobulines de poule (IgGC) et de gammaglobulines de lapin (IgGR) préalablement absorbées par des extraits foliaires de vigne saine, permet la détection de vignes atteintes d’enroulement au moyen d’un protocole ELISA indirect. La comparaison d’extraits végétaux provenant de différents organes de vigne malade montre que les feuilles constituent l’organe de choix pour la détection sérologique des particules de type clostérovirus. Afin de vérifier la corrélation entre la présence de particules virales filamenteuses et l’observation des symptômes d’enroulement, nous avons éprouvé 61 vignes de différents cultivars par le procédé ELISA indirect. Des réactifs immunochimiques spécifiques de particules de type clostérovirus isolées de vignes atteintes d’enroulement nous ont été fournies par le Dr GUGERLI (GLRV1) et le Dr GONSALVES (NY-1). Leur utilisation en ELISA a permis une analyse complémentaire des 61 vignes mentionnées ci-dessus. Parmi les 50 vignes montrant des symptômes d’enroulement, 44 réagissent dans au moins un des 3 systèmes ELISA employés. Aucune vigne saine ne réagit en ELISA. Deux virus différents liés à l’enroulement ont été distingués sur la base des réactions sérologiques obtenues. Des travaux d’immunomicroscopie (ISEM) complètent les études sérologiques en ELISA.
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Dates et versions

hal-02720040 , version 1 (01-06-2020)

Identifiants

  • HAL Id : hal-02720040 , version 1
  • PRODINRA : 86943

Citer

D. Zimmermann, Bernard Walter, Olivier O. Le Gall. Purification de particules virales associees a l'enroulement de la vigne et mise au point d'un protocole ELISA permettant leur detection. Agronomie, 1988, 8 (8), pp.731-741. ⟨hal-02720040⟩

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