Detection of Histomonas meleagridis by PCR amplification, a new diagnostic and epidemiological tool : application for studying the spread of the parasite in the turkey
Détection d’Histomonas meleagridis par PCR, un nouvel outil de diagnostic et de suivi épidémiologique : application dans l’étude de la dissémination du parasite chez la dinde
Résumé
Diagnosis of histomoniasis is difficult and is mainly made on the basis of clinical signs and gross appearance of lesions. Confirmation of this diagnosis is based on direct identification or on cultivation of the parasite. With the aim of developing more sensitive, rapid and useful tools for parasite detection, a PCR that amplified a DNA target of the small subunit rRNA gene was designed to detect the genome of H. meleagridis. The sensitivity of the test was evaluated using serial diluted samples of cultured H. meleagridis and showed positive amplification up to the concentration of 3.10-1 parasites/ml. Sensitivity for droppings samples was assed using spiked material and was found to be 3 parasites/μl of stool. The reliability of the PCR for the detection of Histomonas infection has also been evaluated by experimental infection of turkeys. The birds were infected via the cloaca. Between D0 and D19 a group of four turkeys were sacrificed and autopsied every three day. Cecal and hepatic lesion scores were used to measure severity of infection. For each turkey, 15 tissue samples were taken and analyzed by PCR. For samples of cecal droppings, cecum, cecal content, rectum, proventriculus and bursa of Fabricius the number of positive birds by PCR followed the evolution of the lesion scores. Inside the liver, the parasite was detected only in some severe lesions. The parasite was also detected in duodenum, jejuno-ileum, spleen, heart, lungs and brain samples. The parasite was not detected in the blood, kidneys, pancreas and muscle of the thigh. Results of the PCR appeared to be in agreement with the evolution of the clinical signs and of the cecal lesions.
L'histomonose est d'un diagnostic délicat, basé de façon courante, sur un examen clinique et nécropsique. Le diagnostic de certitude ne peut être apporté que par la mise en évidence du parasite par examen direct microscopique ou par mise en culture à partir du contenu caecal. Dans le but de disposer d'un outil diagnostique plus rapide et plus sensible, une PCR a été développée permettant la détection du génome d'H. meleagridis par l'amplification d'un fragment du gène codant pour la petite sous-unité de l'ARN ribosomal. La sensibilité a tout d'abord été évaluée en utilisant des échantillons dilués d'H. meleagridis en culture. La PCR a permis d'amplifier jusqu'à une concentration de 3.10-1 parasites/ml. La sensibilité a également été estimée à 3 parasites/µl sur fientes caecales enrichies avec du parasite de culture. Afin d'évaluer la fiabilité de cette technique, une étude de la dissémination du parasite chez la dinde a été réalisée. Pour cela un lot de dindes a été infecté per cloaca. De J0 à J19 un lot de quatre dindes a été sacrifié et autopsié tous les trois jours. Une appréciation « scorée » (de 0 à 4) des lésions hépatiques et cæcales a été réalisée, et pour chacune de ces dindes 15 prélèvements de tissus ont été effectués pour une recherche du parasite par PCR. Concernant les fientes caecales, le caecum et le contenu caecal, le rectum, le ventricule succenturié et la bourse de Fabricius le nombre de dindes positives par PCR a suivi l'évolution des scores lésionnels. Dans le foie, le parasite n'a été détecté que dans certaines lésions les plus développées. Le parasite a également été détecté dans le duodénum, le jéjuno-iléon, la rate, le coeur, les poumons et l'encéphale. Le parasite n'a pas été détecté dans le sang, le rein, le pancréas et le muscle de la cuisse. Les résultats de la PCR ont été concordants avec l'évolution des signes cliniques et des lésions caecales.