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L. Sa, L. , and ?. ). Voire-À-l'échelle-nationale, Un tel lieu pourrait être un puissant support de collaborations et de synergies par la mise en commun des équipements de base du site et la participation à des expérimentations communes. Des contacts ont déjà été pris avec le LSCE (B. Bonsang) pour une éventuelle phase expérimentale du projet « Chimie rapide, Au delà des objectifs propres du projet BIOPOLLATM et de celui des équipes de l'IFR-EGER, nous souhaitons que ce site soit ouvert à d'autres partenaires scientifiques de la région parisienne, 2005.

. En-outre and . Le-site-de-grignon-est, Il est également fortement envisagé comme l'un des sites principaux du projet NitroEurope, 2004.

P. Le-site, En outre, dans le cadre d'un projet interne INRA-INA P-G, des suivis de flux d'ammoniac devraient y être conduits à partir de la fin de l'année 2005. Ce site est en outre équipé d'une station météorologique complète, d'un dispositif de mesure de l'humidité du sol, d'une plateforme de mesure du rayonnement (global, diffus, atmosphérique, PAR) et de mesures de concentrations en NH 3 , NO, NO 2 et SO 2 , ainsi que de dépôts humides (pluviomètre « wet-only »), 2005.

, des mesures de flux de CO 2 et H 2 O sont effectuées depuis plusieurs années. Elles ont été complétées depuis le printemps 2003 par des mesures de concentrations et flux d'ozone au dessus et sous la canopée, 2005.

, le site de l'ORE Prairie de Lusignan devrait être équipé d'un analyseur rapide d'ozone pour la mesure des flux, de même qu'un site de forêt de feuillus, soit près de Nancy (INRA, site de Hesse), soit près Fontainebleau (Univ. d'Orsay, site CarboRégion). Le point de blocage actuel est la disponibilité d'analyseurs rapides d'ozone

, Références citées dans la partie 4

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, Thèses réalisées partiellement ou totalement sur le projet

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, Cinq atmosphères, reconstituées en chambres à ciel ouvert, ont été éprouvées : une atmosphère témoin dite « Air Non Filtré » (ANF) constituée d'air prélevé sur le site et 4 atmosphères artificiellement polluées par des ajouts (aux concentrations déjà présentes dans l'air du site) de 20 (ANF+20), 40 (ANF+40), 60 (ANF+60) et 80 (ANF+80) ppb d'ozone. La production et l'injection de l'ozone sont entièrement automatisées. L'enrichissement en polluant se fait à raison de 7 h.jour -1 , entre 10h00 et 17h00 G.M.T., de façon à mimer au mieux le cycle journalier de formation/destruction de l'ozone troposphérique. Les concentrations en ozone mesurées (par absorption UV) dans chaque chambre, L'exposition des plants de maïs à l'ozone a été effectuée à l'aide un dispositif expérimental de fumigation constitué de "chambres à ciel ouvert" sises à Montardon (64121)

, Deux expériences de fumigation d'ozone sur maïs (Zea mays L., cv. Chambord), ont été conduites à Pau durant l'été 2002. L'une a concerné des jeunes plants, l'autre des plants plus âgés. monoclonal anti-SSU le plus performant a ensuite été sélectionné parmi une douzaine de clones

L. Groupements-carbonyle-présents-sur-la-rubisco-ssu-ont-Été-dosés-À-l'aide-d'une-technique-immunoenzymatique-de-type and E. L. Après-kanoun, Après plusieurs lavages successifs, les groupements dinitrophénylhydrazone (DNP) présents sur la SSU sont dosés à l'aide d'anticorps monoclonaux anti-DNP de souris, marqués à la phosphatase alcaline. Après ajout de substrat (para-nitrophénylphosphate) incolore, le nitrophénol jaune libéré sera dosé à 405 nm. Finalement, la quantité de groupement carbonyle, qui traduit le niveau d'altération oxydative de la SSU, sera exprimée de façon arbitraire en unité d'absorbance pour 0,25 µg de SSU. La quantité de SSU étant elle-même calculée à partir de la concentration en protéines totales de l'extrait, 2002.

, Expérimentation en Chambre de fumigation -Grignon, 2002.

, L'objectif principal était de caractériser la réponse des paramètres photosynthétiques du blé à une exposition de courte durée (quelques jours) à des niveaux d'ozone réalistes (100 ppb), simulant ainsi un épisode de pollution à l

, L'originalité de cette étude réside également dans le choix d'étudier la réponse de plantes adultes (stade épiaison), en analysant la réponse à l'ozone des feuilles directement impliquées dans les processus de remplissage des grains

, Après vernalisation à 3°C pendant 5 semaines, les plantes ont été cultivées dans des pots en conditions contrôlées (en chambre de culture climatisées : PPFD = 400 µmol.m -2 .s -1 , température de l'air = 20°C, humidité relative de l'air variant entre 80% la nuit et 55% le jour). Les plantes ont été exposées à l'ozone au moment où les feuilles atteignaient le stade adulte (apparition de la ligule, Dispositif expérimental : Les expérimentations ont été menées sur 4 cultures successives de plants de blé d'hiver (Triticum aestivum, variété Soissons), pp.12-23

, Fumigation des plants

, Le dispositif permet d'injecter dans la chambre de l'ozone produit à partir de dioxygène au moyen d'un générateur (type CMGK 0.05-3, Innovatec, RFA) , et de mesurer alternativement les concentrations en ozone de l'air entrant et sortant de la chambre au moyen d'un analyseur UV (type O3 41 M, Environnement SA

, int = concentration en ozone à l'intérieur de la plante : comme l'ozone est un composé qui réagit extrêmement rapidement et disparaît au contact des cellules

, Une fois l'échantillon réduit en poudre, on rajoute 2,5 mL du tampon d'extraction, afin d'éviter la dégradation des protéines. Lorsque l'extrait est décongelé, on le transvase dans un tube à centrifugation, on rince deux fois le mortier avec 0,5 mL de tampon d'extraction pour récupérer tout l'extrait. On le place dans la glace pour inhiber l'activité des protéases et des enzymes. L'extrait est centrifugé à 20000 G, à 4°C, pendant 15 minutes (centrifugeuse Aventi 30 Beckman, rotor F1010). Le culot contenant tous les débris cellulaires et les protéines insolubles est éliminé, Pour chaque échantillon congelé, on prélève environ 300 mg de feuille que l'on broie dans de l'azote liquide

, L'extrait brut contient les protéines solubles et des composés de faible poids moléculaire, dont certains peuvent inhiber l'activité de certaines enzymes

, Une fois que celui-ci est absorbé, 3,5 mL du tampon d'élution sont ajoutés et on récupère l'extrait brut dessalé dans un pilulier. Le dosage est effectué selon la méthode de Bradford, 1976.

, Détermination des activités enzymatiques

, Les activités enzymatiques sont déterminées par la transformation du NADH en NAD + , le NADH absorbe spécifiquement à 340 nm, son oxydation va entraîner une baisse de son absorbance

, Chez les plantes en C4, elle permet la première fixation du CO 2 en catalysant la carboxylation du phospho-énol-pyruvate (PEP) pour former l'AOA. Cette enzyme n'étant pas NAD(H) (Nicotinamide-adénine-dinucléotide) dépendante, on utilise donc une enzyme de couplage, la malate déshydrogénase à NADH (MDH) ; elle utilise l'AOA comme substrat pour donner du malate. On peut ainsi mesurer l'activité de la PEPc en suivant la consommation de NADH, on aura une diminution de l'absorbance à 340 nm. On ajoute dans le milieu réactionnel du glucose-6-phosphate (G6P) qui est un activateur de la PEPc

, La RubisCO est activée au préalable par Mg 2+ et HCO 3 -à 30°C pendant 15 minutes dans un bain-marie. Une fois l'activation terminée, on démarre la réaction par l'ajout de RuBP dans les cuves essai. La 3PGK étant une enzyme ATP dépendante, on régénère l'ATP en incorporant dans le milieu de la créatine phosphate (CP) et de la créatine-phospho-kinase (CPK), Chez le maïs elle permet la fixation du CO 2 dans les cellules de la gaine

, Calcul des activités enzymatiques Pour chaque enzyme, les activités enzymatiques sont exprimées en nanokatal (nkat)

D. O. =?-*l*c-où,

L. , cm ; et C à la concentration. L'activité enzymatique exprimée en nanokatal pour 1 mL de milieu réactionnel est la suivante, vol.1, p.679

, Traitement statistique des données : Les moyennes des activités enzymatiques PEPc et RubisCO pour le peuplier ont été comparées par un Test t de Student. Celles du maïs par une ANOVA suivie d'un test t protégé. Les lettres au-dessus des graphiques indiquent une différence statistique significative pour un seuil

, ?DO/min*1*10 -3 (L) 6,22*10 -6 *60(sec)