15N nitrogen labelling on tomato fruit pericarp using plants cultivated in semi-controlled green house conditions
Protocole de marquage à l’azote 15N de fruits de tomate issus de plantes cultivées en condition standard
Résumé
Estimating the stability of proteins in plant tissue is an essential but complex question. Today there is very little work showing the feasibility of measuring the turnover of a large panel of plant proteins. Also, we attempted to incorporate labelled nitrogen (15N) into the tomato fruit by adding 5% Ca ( 15NO3)2, to the conventionally used nutrient solution. One month of culture later (with anthesis notation), four 15N incorporation kinetics were performed on fruits at different stages of development during 11 days. Assays of isotopic ratios carried out by EA-IRMS (Elementary Analysis - Isotopic Ratio by Mass Spectrometry) on insoluble residues after hydro-alcoholic extraction show a good in-corporation of the labelling. Combined with total protein assays (Bradford), the results reveal the perfect linearity of 15N enrichment in tomato pericarp during cell expansion phase.
Estimer la stabilité des protéines dans un tissu végétal est une question essentielle mais complexe. Aujourd’hui, il n’existe que très peu de travaux montrant la faisabilité de mesurer le turnover d’un large panel de protéines végétales. Aussi, nous avons tenté d’incorporer l’azote 15N dans le péricarpe de fruit de tomate en ajoutant 5 % de Ca (15NO 3)2 à la solution nutritive classiquement utilisée. Au bout d’un mois de culture avec notation d’anthèses, quatre cinétiques d’incorporation ont été réalisées sur des fruits à différents stades de développement. Démarrées simultanément, elles ont duré 11 jours. Le dosage des rapports isotopiques réalisés par EA-IRMS (Elementary Analysis - Isotopic Ratio by Mass Spectrometry) sur résidus insolubles après extraction hydro-alcoolique rend compte d’une bonne incorporation du marquage. Associés au dosage des protéines totales (Bradford), les résultats obtenus révèlent la très bonne linéarité de l’incorporation de l’azote 15N dans le péricarpe de tomate en phase d’expansion cellulaire
Origine : Fichiers éditeurs autorisés sur une archive ouverte
