Etude du rôle de la protéine pUL51 dans la réplication in vitro et in vivo du virus de la maladie de Marek
Abstract
Le virus de la maladie de Marek (MDV) est un alphaherpèsvirus oncogène de la poule. Le virus établit la latence dans les lymphocytes T et il est excrété dans l’environnement exclusivement via l’épithélium du follicule plumeux (EFP). Le MDV est très contagieux et résistant dans l’environnement. Nous cherchons à déterminer les facteurs viraux impliqués dans le tropisme du virus pour l’EFP et responsables de son excrétion.
Le virus de la varicelle et du zona (VZV) est un alphaherpèsvirus humain dont la biologie est proche de celle du MDV. Chez VZV, l’orthologue de la protéine de tégument pUL51 est importante pour le tropisme du virus pour la peau. Cette protéine mineure de tégument est non-essentielle à la réplication en culture de cellules de virus modèles tels que HSV-1 ou PrV et serait impliquée dans le passage cellule-cellule du virus. Son rôle dans le cycle réplicatif du MDV est néanmoins inconnu.
Afin de déterminer si cette protéine est un facteur de tropisme pour la peau de MDV, nous avons généré une série de virus recombinants soit incapable de produire pUL51 soit exprimant une forme modifiée de pUL51. Nous avons ainsi observé que la protéine est essentielle à la réplication de MDV en culture de cellules. De plus, la fusion de la GFP ou de domaines protéiques de taille équivalente sur pUL51 a également conduit à l’absence de virus viable à l’exception du virus vUL51TAP. Ce virus code pour une protéine pUL51 ayant son domaine C-terminal associé à un domaine TAP (25 kDa) permettant la purification de la protéine. vUL51TAP présente un défaut de croissance modéré avec des tailles de plage de -35% par rapport au contrôle en culture cellulaire. In vivo, le virus est fortement atténué avec des charges virales sanguines diminuées d’un facteur ~50 en moyenne par rapport au contrôle, une mortalité nulle (70% de mortalité pour le contrôle), et la présence de tumeurs sur 10% des animaux seulement (90% pour le contrôle).
Par ailleurs, nous avons établi que pUL51 a une localisation différente selon le type cellulaire infecté : la protéine est présente dans le Golgi de fibroblastes primaires de peau aviaires. Dans les kératinocytes, la protéine est fortement associée aux gouttelettes lipidiques caractéristiques de ce type cellulaire. Les tentatives de purification de pUL51 ont confirmé son affinité pour les lipides.
En conclusion, nous avons démontré que, contrairement aux autres alphaherpèsvirus, pUL51 est essentielle à la réplication virale chez MDV, et que l’ajout d’un domaine protéique en position C-terminale altère modérément sa réplication en culture cellulaire mais est suffisante pour induire une très forte atténuation in vivo. Nous cherchons à présent à déterminer dans quelle mesure la protéine est impliquée dans le passage cellule-cellule ainsi que la base moléculaire de son association aux lipides.