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Thèse

Préparation et utilisation d'anticorps monoclonaux pour caractériser le polypeptide bob TIP 106 du tonoplaste des cellules de chou-fleur (Brassica oleracea L. Var. Botrytis)

Résumé : Une banque d'anticorps monoclonaux specifiquement diriges contre des epitopes du tonoplaste des cellules en differenciation du meristeme inflorescentiel de chou-fleur (brassica oleracea l. Var. Botrytis) a ete construite. L'anticorps monoclonal tem 106 qui est specifiquement dirige contre un polypeptide majoritaire (12%) du tonoplaste a ete selectionne. Le polypeptide reconnu par tem 106 a ete appele bob tip 106 pour signifier qu'il s'agit d'un polypeptide de 106 000 daltons intrinseque du tonoplaste de brassica oleracea l. Var. Botrytis. Bob tip 106 est glycosyle et contient des residus mannose ou glucose mais l'epitope est peptidique. Par immuno-microscopie, nous avons montre que bob tip 106 est specifiquement associe au tonoplaste et que l'epitope est localise a sa face luminale. Bob tip 106 a ete solubilise et separe des autres constituants de la membrane par centrifugation en gradient de densite. Bob tip 106 co-migre avec la v-atpase. Des immuno-precipitations croisees ont montre que bob tip 106 et la v-atpase sont solidaires et constituent vraisemblablement un complexe proteique dans le tonoplaste. La membrane des vesicules a clathrine contient la v-atpase mais ne contient pas bob tip 106. L'anticorps monoclonal tem 106 a ete utilise pour reperer dans la banque d'adnc de chou-fleur les clones producteurs de la sequence peptidique contenant l'epitope. Un insert de 2 400 pb a ete isole. Il s'hybride avec des arnm de 3,2 kb susceptibles de coder le polypeptide bob tip 106. Les microsequences peptidiques internes seront comparees aux sequences peptidiques putatives deduites des sequences nucleotidiques pour s'assurer de la validite du reperage immunologique. L'expression des genes codant bob tip 106 a ete localisee dans les tissus du chou-fleur par hybridation. Les transcrits sont abondants dans les cellules du meristeme. Nous avons montre que les transcrits putatifs bob tip 106 s'accumulent dans les tissus en conditions de contrainte hydrique.
Mots-clés : these
Type de document :
Thèse
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https://hal.inrae.fr/tel-02838395
Déposant : Migration Prodinra <>
Soumis le : dimanche 7 juin 2020 - 12:35:46
Dernière modification le : vendredi 12 juin 2020 - 10:43:26

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  • HAL Id : tel-02838395, version 1
  • PRODINRA : 449624

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Pascale Seddas-Dozolme. Préparation et utilisation d'anticorps monoclonaux pour caractériser le polypeptide bob TIP 106 du tonoplaste des cellules de chou-fleur (Brassica oleracea L. Var. Botrytis). Sciences du Vivant [q-bio]. Université de Bourgogne, 1997. Français. ⟨tel-02838395⟩

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