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Theses Year : 2012

IDENTIFICATION, ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF OVINE BRONCHIOLOALVEOLAR PROGENITORS

IDENTIFICATION, ISOLEMENT ET CARACTERISATION DES PROGENITEURS BRONCHIOLOALVEOLAIRES OVINS

(1)
1
Alain Abi Rizk
  • Function : Author
  • PersonId : 948131

Abstract

Bronchioloalveolar stem cells located at the bronchiolar/alveolar junction may be involved in embryogenesis or regeneration. These cells have not yet been described in large animals, and they may enable the development of new therapeutics to treat acute or chronic lung disease. In this study, we aimed to establish the presence of bronchioloalveolar stem cells in ovine lungs and to characterize their stemness properties. Lung cells were studied using immunohistochemistry on frozen sections of the lung, and immunocytochemistry and flow cytometry were conducted on derived cells. The stem cells were identified by co-expression of CCSP, SP-C and the CD34 hematopoietic stem-cell marker. A minor population of CD34pos/SP-Cpos/CCSPpos cells (0.33% ± 0.31) was present ex vivo in cell suspensions from dissociated lungs. Using CD34 magnetic positive cell sorting, undifferentiated SP-Cpos/CCSPpos cells were purified (>80%) and maintained in culture. Using synthetic media and various extracellular matrixes, SP-Cpos/CCSPpos cells differentiated into either Clara cells or alveolar epithelial type-II cells. Furthermore, bronchioloalveolar stem cells obtained ex vivo and in vitro expressed the stem cell-specific genes NANOG, OCT4 and BMI1. We report for the first time in a large animal the existence of bronchioloalveolar stem cells with dual differentiation potential and the expression of stem cell-specific genes.
Les progéniteurs bronchioloalvéolaires situés aux jonctions bronchioloalvéolaires peuvent être impliqués dans l'embryogenèse ou la régénération. Ces cellules non décrites chez les gros animaux peuvent participer au développement de nouvelles thérapies contre les maladies pulmonaires aiguës ou chroniques. Dans cette étude, nous avons établi la présence de progéniteurs bronchioloalvéolaires dans les poumons des ovins nouveaux nés. Ces cellules ont été identifiées par leur co-expression des protéines CCSP, SP-C et CD34. Une population mineure de cellules CD34pos/SP-Cpos/CCSPpos (0,33% ± 0,31) était présente ex vivo. Le tri magnétique des cellules CD34pos a permis l'isolement des progéniteurs SP-Cpos/CCSPpos (> 80%). Ces cellules étaient maintenues et amplifiées in vitro en interface liquide/liquide. De même, ces progéniteurs étaient capables de se différencier soit en cellules de Clara soit en AEC II dans différents milieux de cultures synthétiques et diverses matrices extracellulaires. En outre, les progéniteurs bronchioloalvéolaires obtenus ex vivo et in vitro exprimaient les gènes NANOG, Oct4 et BMI1 spécifiques aux cellules souches. Nous rapportons ainsi, pour la première fois dans un grand animal, l'existence de cellules progénitrices bronchioloalvéolaires à fort potentiel de double différenciation et d'expression de certains gènes de cellules souches.
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Dates and versions

tel-00903271 , version 1 (11-11-2013)

Identifiers

  • HAL Id : tel-00903271 , version 1
  • PRODINRA : 314985

Cite

Alain Abi Rizk. IDENTIFICATION, ISOLEMENT ET CARACTERISATION DES PROGENITEURS BRONCHIOLOALVEOLAIRES OVINS. Organisation et fonctions cellulaires [q-bio.SC]. Université Claude Bernard - Lyon I, 2012. Français. ⟨NNT : 109- 2012⟩. ⟨tel-00903271⟩
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