Risk of false-negative results when delaying PCR from sampling for Coxiella burnetii detection in dairy cows
Influence du délai d’analyse sur la persistance d’un résultat PCR Coxiella burnetii positif
Résumé
Reliable detection of Coxiella burnetii shedders is a critical point for the control of the spread of the infection between animals and from animals to humans. PCR is the most suitable tool for the detection of Coxiella burnetii in cattle. In routine diagnosis, the samples are usually sent to laboratories by postal routing. This study aimed at assessing the risk of false-negative results with delaying PCRs from sampling for Coxiella burnetii detection. Thirty six milk and 13 vaginal mucus samples being PCR positive on sampling day were divided in 8 aliquots each: 3 stored at +4°C and 5 frozen at –20°C. Real-time PCR were performed on days (D) 1, 2, 3 (or 5) for samples stored at +4°C and days 3 (or 5), 7, 14, 28, 63 for frozen samples. Regardless of the storage, the proportion of samples which remained positive on the first test day after sampling day decreased by about one third and one half for milk and vaginal mucus respectively. Regardless the storage, samples found to be persistently-positive had a significantly higher estimated titre on D0 than those which became negative after D0. In absence of hypothesis on the expected bacterial burden in a milk or vaginal mucus sample, PCR assay should be performed on sampling day to minimise the risk of obtaining a false-negative result.
La détection des animaux excréteurs de Coxiella burnetii est un point critique pour le contrôle de la transmission de l’infection entre animaux et des animaux à l’homme. La PCR est aujourd’hui la méthode privilégiée pour la détection de Coxiella burnetii chez les bovins. Lors de diagnostic de routine, les échantillons sont généralement envoyés par courrier au laboratoire. La présente étude a pour objectif d’étudier l’influence du délai d’analyse sur la persistance d’un résultat PCR Coxiella burnetii positif. Dans ce but, 36 prélèvements de lait et 13 prélèvements de mucus (positifs par PCR temps réel à J0) ont été divisés en 8 fractions aliquotes : 3 conservées à 4°C et 5 à -20°C et soumises à analyse à J1, J2 et J3 (ou 5 selon les jours ouvrés) pour les 3 fractions conservées à 4°C et à J3 (ou 5), J7, J14, J28, J63 pour les 5 fractions conservées à -20°C. Près de 33% des échantillons de lait et 50% des échantillons de mucus vaginaux positifs à J0 sont apparus négatifs dès le 1er jour de conservation en frais et dès le 3ème ou 5ème jour en conservation congelée. Aucune perte d’information pour les échantillons présentant un titre initial élevé en Coxiella n’a été relevée. Enfin, 3 à 5 jours après le prélèvement, le mode de conservation n’a eu aucune influence sur la détectabilité de l’ADN de Coxiella. Aussi, sans connaissance a priori de la charge bactérienne attendue d’un échantillon, l’analyse PCR devrait être réalisée le jour du prélèvement afin d’écarter le risque d’apparition de faux négatifs.