Este trabalho teve como objetivo verificar a prevalência e etiologia infecciosa da mastite bovina em propriedades leiteiras da microrregião de Cuiabá, estado de Mato Grosso. Foram examinadas 108 vacas pertencentes a rebanhos desta microrregião. Em seguida, submeteram-se 279 amostras de leite provenientes de quartos mamários mastíticos a provas microbiológicas. Dos animais examinados, 85,2% eram portadores de mastite em pelo menos um quarto mamário. O percentual de quartos mamários afetados pela mastite clínica e subclínica foi de 5,8 e 65%, respectivamente. Quanto à etiologia, nos casos de mastite subclínica os agentes causais mais isolados foram Corynebacterium spp. (27,6%) e Staphylococcus aureus (21,5%). Dentre os casos de mastite clínica, isolaram-se com maior freqüência S. aureus (44,0%) e Corynebacterium spp. (12,0%). Embora a elevada prevalência de S. aureus e Corynebacterium spp. como causadores de mastites corrobore o verificado em estudos realizados em outras regiões do Brasil, a baixa prevalência de bactérias do gênero Streptococcus nos casos analisados difere do observado em tais relatos.