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Sélection et caractérisation d'ARN synthétiques ligands de la protéine prion ovine recombinante

Résumé : La nature exacte de l'agent infectieux responsable des Encéphalopathies Subaigües Transmissibles (EST) demeure une énigme. Cet agent est majoritairement composé d'une protéine constitutive de l'hôte, la protéine prion (PrP) dont la conformation anormale contiendrait, selon l’hypothèse prion, toute l'information caractérisant l'agent. Jusqu’à présent, toutes les tentatives d'identification d'un acide nucléique dans l’agent se sont révélées infructueuses. Pourtant, la diversité observée des souches ainsi que le phénomène d'adaptation sont deux propriétés caractéristiques des agents infectieux conventionnels, liées à l’existence d'un acide nucléique portant une information à la fois stable et susceptible d’évoluer par mutations. En outre, la protéine prion, dont on ignore la fonction exacte, montre in vitro des propriétés de chaperone à l’égard des ARN. Pour corroborer ces observations et tenter d’élucider le rôle de PrP et la nature de l’agent, nous avons cherché à caractériser des motifs séquentiels ou structuraux permettant à des ARN de se lier à la protéine prion. Des ARN synthétiques se liant in vitro à la protéine prion recombinante ovine ont été isolés par la méthode SELEX (Systematic Evolution of Ligand by EXponential enrichment), puis clonés et caractérisés. Une collection de 119 clones, obtenus à l'issue de 3 séries indépendantes de sélection, a été constituée. La moitié des clones correspondent à des séquences retrouvées deux fois ou plus, constituant ainsi 4 groupes et 9 paires. Certains groupes distincts ont en commun des motifs de séquence similaires. Les comparaisons aux banques de séquences accessibles en ligne n'ont pas permis d'identifier ces motifs dans les génomes séquencés. Les ligands ont ensuite été classés suivant leur affinité mesurée au biacore ; le clone le plus fréquent dans la collection est également le plus affin (Kd=15nM). Outre l'utilisation de ces ARN synthétiques comme outil de diagnostic, cette collection de motifs est une première étape vers l'identification d'ARN ligands naturels de la PrP.
Type de document :
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Liste complète des métadonnées

https://hal.inrae.fr/hal-02762718
Déposant : Migration Prodinra <>
Soumis le : jeudi 4 juin 2020 - 06:32:26
Dernière modification le : lundi 28 septembre 2020 - 09:56:02

Identifiants

  • HAL Id : hal-02762718, version 1
  • PRODINRA : 277788

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Citation

Raphael Mercey, Marie-Christine Maurel, Isabelle Lantier, Frédéric Lantier, Daniel Marc. Sélection et caractérisation d'ARN synthétiques ligands de la protéine prion ovine recombinante. 17. Colloque Biotechnocentre, Nov 2004, Fondjouan, France. 72 p., 2003. ⟨hal-02762718⟩

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