Cryopreservation of germinal stem cells in rainbow trout: a strategy to entirely restore a genotype of interest
La cryoconservation des cellules germinales souches chez la truite arc-en-ciel : une stratégie pour restaurer l’intégralité d’un génotype d’intérêt
Résumé
Cryobanking of fish genetic resources relies exclusively on sperm cryopreservation, as the cryopreservation of oocytes and embryos is not possible in these species with telolecithal eggs. However, the cryopreservation of germinal stem cells is achievable, because they are structurally less complex than fish oocytes and embryos. In addition, it is shown that when germinal stem cells are injected into the peritoneal cavity of recipient fries, they colonize the fry gonads and undergo gametogenesis, thereby leading to the production of functional gametes. In the course of building the infrastructure of BRC Anim, the animal component of the AgroBRC/RARe infrastructure, a method for germinal stem cell cryopreservation was set up for rainbow trout. Here, we present and comment the final procedure that was adopted: the extenders were devoid of animal products, thawed cell quality was validated, and their ability to colonize recipient gonads was demonstrated. The cryopreservation strategy described enables the cryobanking of biological materials that support the regeneration of a complete genotype of interest after cryopreservation in fish.
La conservation en cryobanque des ressources génétiques chez les poissons repose uniquement sur la cryoconservation du sperme, puisque la cryoconservation des ovules et des embryons chez ces espèces à œufs télolécithes est toujours impossible. Pour autant, la cryoconservation des cellules germinales souches est envisageable. On sait, par ailleurs, que des cellules germinales souches injectées dans la cavité abdominale d’alevins receveurs intégraient leurs gonades et conduisaient in fine à la production de gamètes fonctionnels. Dans le cadre de la mise en place de l’infrastructure CRB Anim, pilier animal de RARe, une méthode de cryoconservation des cellules germinales souches a été mise au point chez la truite arc-en-ciel. Nous présentons et commentons ici la méthode retenue : le recours aux protéines d’origine animale dans le dilueur a été évité, la qualité des cellules décongelées a été validée et leur capacité à coloniser les gonades d’alevins receveurs a été démontrée. La stratégie de cryoconservation décrite permet l’entrée en cryobanque d’un matériel biologique qui assure la restauration de l’intégralité d’un génotype d’intérêt après cryoconservation chez les poissons.
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