Afin d'ameliorer les performances du sperme de truite (oncorhynchus mykiss) apres congelation, nous avons tente de modifier chaque etape du processus de congelation : prelevement du sperme, constituants des dilueurs de congelation et de fecondation, taille des paillettes, vitesse de descente en temperature. Ni la modification des composants du dilueur de congelation, ni les changements de vitesse de refroidissement ou de taille de paillette n'ont ameliore la survie des spermatozoides apres congelation. En revanche, une augmentation significative de la fecondance du sperme apres congelation a ete obtenue en ajoutant de la cafeine au dilueur de fecondation. Cette molecule, inhibitrice des phosphodiesterases, permet d'augmenter les niveaux intracellulaires d'ampc lors de l'initiation du mouvement. Le protocole de congelation elabore pour la truite a ete applique a d'autres especes de poissons : le turbot (scophthalmus maximus), le poisson chat europeen (silurus glanis l. ) et le tilapia (oreochromis niloticus). Pour chacune des ces especes et pour la truite, les dommages membranaires et mitochondriaux subis par les spermatozoides ont ete evalues par cytometrie en flux et les dommages energetiques par le dosage de l'atp avant et apres congelation. Les resultats obtenus ont mis en evidence l'importance de l'aspect energetique pour le succes de la congelation. Les differentes especes etudiees presentent une aptitude a la congelation differente. De plus, le cryoprotecteur le plus efficace differe d'une espece a l'autre : le dmso pour la truite, le dmso, le dimethylacetamide et le propylene glycol pour le turbot, le dimethylacetamide pour le silure et le methanol pour le tilapia. Une technique d'etude de la permeabilite membranaire aux cryoprotecteurs a ete mise au point afin de tenter d'expliquer ces differences. Les resultats obtenus nous conduisent a emettre l'hypothese qu'une penetration du cryoprotecteur n'est pas necessaire pour la protection des spermatozoides.