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IDENTIFICATION ET CARACTERISATION MOLECULAIRE D'UNE NOUVELLE FAMILLE DE GENES MARQUEURS DES CELLULES SOUCHES EMBRYONNAIRES DE POULET

Abstract : Les cellules souches embryonnaires de poulet (CES) sont des cellules pluripotentes capables de se différencier in vitro en de multiples types cellulaires représentant les trois feuillets embryonnaires. Ces cellules sont également capables de coloniser de nombreux lignages cellulaires d’un embryon hôte, dont la lignée germinale (avec une efficacité très faible). Afin de préciser la nature moléculaire des cellules CES, nous avons utilisé la stratégie du piégeage de gène pour identifier des gènes exprimés spécifiquement dans ces cellules . Nous avons ainsi isolé une nouvelle famille de gènes, appelés ENS pour Embryonic Normal Stem cell genes, exprimés spécifiquement dans les cellules ES et l’embryon précoce de poulet. Trois gènes ont été caractérisés : cENS-1 code pour une protéine de 490 acides aminés, identique à cERNI, dont la séquence codante est insérée entre deux séquences répétées d’environ 500 paires de base. cENS-2 est une forme tronquée de cENS-1 et cENS-3 comporte deux cadres ouverts de lecture correspondant aux gènes rétroviraux pol et env. Par analogie avec la structure du génome retroviral, nous avons isolé une région promoteur des gènes ENS dont l’activité est spécifique des cellules CES. Pour comprendre les mécanismes conférant sa tissu-spécificité au promoteur ENS, nous avons réalisé un découpage systématique du promoteur et identifié ainsi deux régions, l’une activatrice et importante pour le fonctionnement de ce promoteur, l’autre répressive et restreignant l’activité du promoteur aux cellules CES indifférenciées. Nous avons caractérisé dans la région activatrice deux éléments de réponse, A et B, fixés par des facteurs présents dans des extraits nucléaires de cellules CES. Nous avons ensuite étudié la fonctionnalité de ces éléments par transfection dans des cellules CES. Nous avons alors montré que seul l’élément B était nécessaire pour activer le promoteur ENS dans ces cellules. Par contre, nos résultats suggèrent qu’il n’est pas suffisant pour assurer la tissu-spécificité du promoteur ENS. La similitude de la séquence de l’élément B avec celle connue pour fixer le facteur de transcription CP2 (5’-CNRG-N6-CNRG) nous a amené à vérifier si le complexe protéique fixé sur l’élément B comprenait le facteur CP2. Par des expériences de supershift avec un antisérum dirigé contre CP2, nous avons montré que le complexe fixé sur l’élément B comprenait un facteur de transcription de la famille CP2. L’analyse du profil d’expression de la protéine CP2 dans les cellules CES confirme cette observation. La tissu-spécificité du promoteur ENS est certainement rendu possible par la présence de ces deux régions, l’une nécessaire à l’activité du promoteur, l’autre bloquant cette activité dans les cellules différenciées. L’analyse fonctionnelle de la région inhibitrice permettra d’identifier les acteurs moléculaires conduisant à l’expression spécifique des gènes ENS dans les cellules souches embryonnaires de poulet.
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https://hal.inrae.fr/tel-02912760
Contributor : Hervé Acloque <>
Submitted on : Thursday, August 6, 2020 - 4:12:49 PM
Last modification on : Wednesday, June 16, 2021 - 3:52:04 AM
Long-term archiving on: : Monday, November 30, 2020 - 3:56:28 PM

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Hervé Acloque. IDENTIFICATION ET CARACTERISATION MOLECULAIRE D'UNE NOUVELLE FAMILLE DE GENES MARQUEURS DES CELLULES SOUCHES EMBRYONNAIRES DE POULET. Sciences du Vivant [q-bio]. Université Claude Bernard Lyon 1, 2003. Français. ⟨tel-02912760⟩

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