La caractérisation du régime alimentaire des ruminants au pâturage au sein de prairies diversifiées est un verrou méthodologique qui pourrait en partie être levé à l’aide de méthodes basées sur l’analyse de l’ADN présent dans des échantillons environnementaux (métabarcoding). Pour évaluer la fiabilité de cette technique, nous avons mené deux expérimentations au cours desquelles l’ADN issu d’échantillons de contenu du rumen et de fèces a été extrait. Un fragment court d’ADN chloroplastique a été amplifié en utilisant des amorces universelles (approche trnL) et les produits PCR ont été séquencés en utilisant un système HighSeq Illumina. La première expérimentation a consisté à comparer les résultats obtenus à partir d’extractions et de PCRs répétées sur des fèces de bovins alimentés avec un régime diversifié et a permis de valider la reproductibilité de la méthode. La deuxième expérimentation a été conçue pour évaluer les aspects semi-quantitatifs de cette approche. Cinq moutons ont été alimentés ad libitum selon un carré latin 5 × 5 avec cinq mélanges binaires de ray-grass anglais et de trèfle blanc en proportions variables (0:100, 25:75, 50:50, 75:25 et 100:0). Les analyses de contenu du rumen ont permis de quantifier de manière fiable les proportions ingérées de chaque espèce, tandis que l’information issue de l’analyse des fèces était beaucoup moins précise. Des solutions techniques et analytiques sont actuellement examinées pour améliorer la quantification à partir des échantillons fécaux