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Poster communications

Caractérisation structurale de nouvelles isoformes de β-défensines aviaires par Top Down et détermination de leur activité antimicrobienne

Résumé : Les défensines sont des acteurs majeurs de l’immunité innée des muqueuses. Ces peptides cationiques présents dans tout le règne animal sont composes de 30 a 50 acides aminés et possèdent une activité antibactérienne, antifongique et antivirale. Les défensines représentent ainsi des molécules candidates comme alternative aux antibiotiques. Malheureusement, du fait de leur structure très compacte en feuillet β stabilisé par trois ponts disulfures, les défensines sont difficiles a produire sous forme recombinante ou par synthèse peptidique. Cependant, les β-defensines aviaires (AvBD) qui possèdent une forte homologie de séquence et de structure avec les β-defensines humaines sont, pour certaines, fortement produites dans la moelle osseuse de poulet. L'analyse protéomique par bottom-up et top down d'un extrait de moelle nous a déjà permis d'identifier et de caractériser trois AvBD ( l , 2 et 7), puis de montrer la présence d'une forme tronquée pour l' AvBD2 et l' AvBD7. Ces formes pourraient être générées in vivo par l'action de protéases, mais leur activité antibactérienne n' est pas connue. Noue travail a donc consisté a caractériser par spectrométrie de masse a haute résolution par une approche Top down, l'ensemble des isoformes de l'AvBD 1, 2 et 7, et a mesurer leur activité antimicrobienne. Nous avons donc développé une stratégie basée sur !'utilisation de cathepsines a cysteine, protéases déjà connues pour dégrader certaines defensines humaines afin de générer, par protéolyse ménagée, des isoformes d’intérêt. Nous avons évalué l'action de 5 cathepsines humaines (B, H, K, LetS) sur les formes complètes d' AvBD 2 et 7. Pour cela, le clivage par les protéases a été suivi par RP-HPLC couple a la spectrométrie de masse MALDI-TOF en mode linéaire et réflection. Cette étude a permis de caractériser finement 1 , 4 et 3 isoformes supplémentaires respectivement pour I' AvBD 1, 2 et 7 avec la perte de 1 a 3 résidus N ou C-ter. De plus, deux cathepsines (B et K) se sont révélées être des outils de choix pour générer certaines isoformes de I' AvBD 2 et 7. Les premiers tests d’activité microbienne sur 2 souches (Gram + et-) ont permis d'observer que le pouvoir antibactérien des isoformes pouvait être variable. Ces premiers résultats apportent de nouvelles informations a prendre en compte pour la conception de thérapies futures.
Document type :
Poster communications
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https://hal.inrae.fr/hal-02748470
Contributor : Migration Prodinra Connect in order to contact the contributor
Submitted on : Wednesday, June 3, 2020 - 1:37:16 PM
Last modification on : Thursday, August 5, 2021 - 3:44:56 AM

Identifiers

  • HAL Id : hal-02748470, version 1
  • PRODINRA : 173033

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Citation

Valérie Labas, Amanda Kravtzoff, Grégoire Harichaux, Ana-Paula Teixeira-Gomes, Gilles Lalmanach, et al.. Caractérisation structurale de nouvelles isoformes de β-défensines aviaires par Top Down et détermination de leur activité antimicrobienne. 29. Congrès de la Société Française d'Electrophorèse et d'Analyse Protéomique, Oct 2012, Rouen, France. pp.169, 2012, 29ème Congrès SFEAP. ⟨hal-02748470⟩

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