Chez les plantes, les Mitogen Activated Protein Kinases (MAPK) et les Calcium Dependent Protein Kinases (CDPK) forment deux groupes de protéines de signalisation intracellulaire impliquées dans les réponses aux stress biotiques et abiotiques. La caractérisation des substrats de MAPK et CDPK est un élément essentiel de la compréhension de leurs fonctions. Dans le présent travail nous nous intéressons à la caractérisation de deux nouveaux substrats communs à MPK3 et CPK5/6 : TCP14, un facteur de transcription, et ATI-2 un inhibiteur de phosphatase. Combinant mutagénèse dirigée et tests d’activité kinase in vitro, nous avons réussi à isoler un site de phosphorylation unique pour MPK3 chez ATI-2 : la sérine 9 et deux sites pouvant fonctionner de façon conjointe concernant la phosphorylation de TCP14 par MPK3 : la sérine 58 et la thréonine 255. Nous avons également montré qu’ATI-2 était substrat de MPK6 in vitro, en un site unique, la sérine 9. Ces résultats serviront par la suite à mieux comprendre le rôle des deux substrats en fonction de leur phosphocode.