L'allaitement confère de nombreux bienfaits pour la santé, en favorisant le développement du système immunitaire et de la fonction barrière de l’intestin chez les nourrissons. Notre hypothèse est que le microbiote du lait maternel humain contribue à ces bénéfices santé. Notre objectif était d'explorer le rôle des bactéries du lait maternel, seules ou assemblées dans des communautés bactériennes synthétiques (SynCom), sur l'homéostasie intestinale. Une collection de bactéries, reflétant la composition du microbiote du lait, a été constituée à partir de 28 donneuses en bonne santé, allaitant exclusivement. Tout d'abord, le profil immunomodulateur de 84 souches représentatives de la diversité taxonomique du lait maternel a été étudié sur des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC). Ensuite, un modèle quadricellulaire (Caco2, HT29-MTX-E12, cellules M, THP1) de l'épithélium intestinal a été utilisé pour caractériser plus finement un sous-ensemble de 29 souches. Les isolats ont été caractérisés pour leur capacité à moduler la production d'IL-10 et de TNF-α et l'expression de gènes associés notamment aux fonctions barrière et immunitaire. Sur la base de ces résultats, deux SynComs ont été créées et caractérisées sur le modèle quadricellulaire. Les analyses intégratives « MultiDimensional Scaling » et sPLS-DA (sparse Partial Least Squares-Discriminant Analysis) des variables mesurées sur le modèle PBMC puis sur le modèle quadricellulaire stimulé avec les souches du lait maternel ont révélé des groupes de souches ayant un impact différent sur la production de cytokines, l'expression de gènes impliqués dans l'immunité, la fonction barrière et le signaling bactérien. Ces groupes fonctionnels sont très faiblement corrélés à la taxonomie et leur composition souligne l’intérêt de genres et d’espèces prévalents du lait maternel (Staphylococcus, Cutibacterium…) au même titre que des genres plus explorés dans ce contexte (Bifidobacterium, Lactobacillus). Enfin, les souches assemblées dans deux SynComs représentatives du microbiote du lait (11 souches) ont présenté des propriétés immunomodulatrices contrastées. Cette étude montre la grande diversité de potentiel immunomodulateur et d'impact sur la fonction de barrière des bactéries du lait maternel, individuellement ou assemblées en SynCom, soulignant le potentiel de ce microbiote pour moduler le développement de l'homéostasie intestinale.